Hücre Hattının Dondurulması

 Amaç
 Kullanılan hücreler, yapılan çalışmada duyulan ihtiyaçtan daha fazla sayıda çoğalıyor veya yapılan çalışma bitmiş ya da ara verilecek ise uygun koşullarda dondurularak saklanabilir. Hücrelerin dondurulması, hücrelerin yeniden çözüldüğünde canlılıklarının iyi olması için çok dikkat edilmesi gereken bir işlemdir.


Malzemeler                                    Stok konsantrasyon      Final konsantrasyonu       100ml ortam
Besi ortamı (RPMI1640,                                                                %70                             0.7 mL
DMEM, DMEM/F12 1:1
, MEM) 

Fetal bovin serum (FBS)                                                                 %20                            0.2 mL

DMSO veya gliserol                                                                        %10                            0.1 mL

Toplam                                                                                                                                   1 mL



Uygulama Basamakları
1. Su banyosu 370 C’ye ısıtılır.
2. Hücre besi ortamı ve serum su banyosunda 370 C’ye ısıtılır.
3. ‘Hücre Pasajlanması’ protokolünde belirtildiği şekilde hücre pelleti elde edilir.
4. Hücre pelleti, 1 mL dondurma ortamı içinde süspande edilir ve ‘cryovial’ adı verilen tüplere konulur (Hücre süspansiyonunda 2-4 x106 hücre/ml olması, yeniden çözüldüğünde hücre canlılığının iyi olması açısından önemlidir).
5. Hücrelerin bulunduğu tüpler dondurma kabına konulur ve –80ºC’de bir gece bekletilir.
6. Ertesi gün sıvı azot tankına transfer edilir.



Kaynaklar
 1. Freshney, RI, 2000. Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 3rd edition; Wiley-Liss, New York.
 2. Davis, JM, 2002. Basic Cell Culture, 2nd edition; IRL, Oxford.
 3. Bonifacino, JS, Dasso, M, Harford, JB, Lippincott-Schwartz, J, and Yamada, KM, 2000. Current Protocols in Cell Biology, Wiley, New York.